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一年，四季，二十四節(jié)氣，

隱藏著大自然的規(guī)律。

寒氣凜冽，飛雪彌天。

12月7日，遇見“大雪”

大雪，

農(nóng)歷二十四節(jié)氣中的第21個(gè)節(jié)氣，

更是冬季的第三個(gè)節(jié)氣，

標(biāo)志著仲冬時(shí)節(jié)的正式開始。

大家還記得自己在冬季的食材嗎？

一杯暖暖的星爸爸？

這是戒不掉的“拿鐵因子”

一鍋色香味俱全的豬肚雞火鍋？

這是滿滿的“膠原蛋白”

那么，食材決定你的卡路里，

富有濃濃膠原蛋白氨基酸，

充滿活力的他們幾乎要跳出頁面了！

今天飛飛為大家呈上氨基酸測定的全面解決方案，讓我們一起在“大雪”這個(gè)節(jié)氣里，探索生命之源，揭開氨基酸的神秘面紗。

 什么是氨基酸？

氨基酸是生物體中重要的生命物質(zhì)，是組成酶和蛋白質(zhì)的基本單元。作為小分子，氨基酸對(duì)生物大分子的活性及其生理功能起著極為重要的作用。氨基酸分析在生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)和環(huán)境化學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，對(duì)于氨基酸的檢測一直是分析化學(xué)的一個(gè)熱點(diǎn)。

氨基酸的分析方法比較繁多，主要體現(xiàn)在儀器、衍生劑和檢測器種類多，這無疑給科研工作者的選擇帶來了困難。

不要擔(dān)心，飛飛來幫你！

氨基酸常用分析方法

目前常用的方法主要有氨基酸衍生儀、離子色譜法和液相色譜法。液相作為一個(gè)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器，在氨基酸檢測方面具有廣泛的用戶基礎(chǔ)。大多數(shù)氨基酸不具有發(fā)色團(tuán)，紫外吸收較弱，用紫外檢測需要進(jìn)行衍生后再測定 ，目前常見的衍生方法有OPA-FMOC柱前衍生、AQC柱前衍生，茚三酮柱后衍生等；另外采用電霧式檢測器（CAD）可以不經(jīng)過衍生直接測定氨基酸，簡化了測定步驟、節(jié)約了測定時(shí)間。接下來小編就給大家把這些好用的方法一一道來。

OPA-FMOC柱前衍生方案

首先是OPA-FMOC柱前衍生方案，鄰苯二甲醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）衍生化方法具有樣品制備簡單、反應(yīng)迅速、可自動(dòng)化在線衍生等優(yōu)點(diǎn)，衍生反應(yīng)可以在常溫下快速完成，OPA衍生一級(jí)氨基酸，F(xiàn)MOC衍生二級(jí)氨基酸。該方法采用兩個(gè)波長測定，338nm測定一級(jí)氨基酸衍生產(chǎn)物，263nm測定二級(jí)氨基酸（脯氨酸）衍生產(chǎn)物。

賽默飛U3000液相具有強(qiáng)大的用戶自定義進(jìn)樣程序（UDP，user defined program）功能，可以實(shí)現(xiàn)在線稀釋、在線衍生和大體積多次進(jìn)樣等，只需在進(jìn)樣器模式（Inject Mode）中，選擇“UserProg”，即進(jìn)入自定義進(jìn)樣程序（UDP）編輯界面，選擇所需要的命令即可以輕松實(shí)現(xiàn)OPA-FMOC在線自動(dòng)化衍生。結(jié)合Accucore C18色譜柱可以完美地將17種常見氨基酸進(jìn)行分離。圖1為OPA-FMOC柱前衍生方法譜圖。

圖1  OPA-FMOC在線衍生測定17種氨基酸譜圖

AQC柱前衍生方案

其次是采用6-氨基喹啉-N-羥基琥珀酰亞氨基氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，該衍生方法具有靈敏度高、衍生產(chǎn)物穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，但不能用于在線自動(dòng)衍生，需要衍生完成后再上機(jī)測定，因?yàn)樵撗苌磻?yīng)需要在高溫下進(jìn)行一定時(shí)間才能完成。

賽默飛Acclaim RSLC C18色譜柱快速分析17種氨基酸的譜圖，采用U3000 RSLC快速液相在12分鐘內(nèi)就可以結(jié)束分析。圖2為AQC柱前衍生方法譜圖。

圖2  AQC衍生快速測定17種氨基酸譜圖

不需衍生、直接測定的方案

最后隆重登場的是我們目前受歡迎的通用型檢測器電霧式檢測器帶來的不需衍生、直接測定的方案，電霧式檢測器作為新型原理、高靈敏度的通用型質(zhì)量檢測器，可以測定半揮發(fā)和難揮發(fā)性物質(zhì)。與蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）相比，CAD具有更高的檢測靈敏度、更好的重復(fù)性和更寬的動(dòng)態(tài)響應(yīng)范圍，近年來相繼有脫氧膽酸、釓布醇等品種的CAD檢測方法被USP和EP所收錄。圖3為采用該檢測器和HyperCarb 石墨化碳色譜柱分析19種氨基酸的譜圖。

圖3 無需衍生電霧式檢測器直接測定19種氨基酸譜圖

飛飛總結(jié)語

三種方法各有千秋，既可以滿足常規(guī)氨基酸檢測需求，也都具有良好的重復(fù)性。就穩(wěn)定性而言，不衍生直接用CAD測定的方法無疑穩(wěn)定性較好，另外兩種采用衍生的方法，OPA-FMOC衍生方法可以在線自動(dòng)衍生測定，樣品處理好后上機(jī)即可無人值守完成衍生測定，較AQC方法可以省去手動(dòng)衍生處理的步驟和時(shí)間。

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