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食品中添加劑檢測前處理過程十分繁瑣，之前介紹過食品中維生素ADE的方法，通過雙三元液相全自動在線二維分析技術，可以省去繁重的離線制備過程，分析效率得以飛速提升^[1]。此次賽默飛針對低含量VB12添加的飼料檢測，同樣輕松應對難題，解放雙手，工作效率倍增。

飼料維生素檢測難點

現行有效的國標方法主要有“添加離子對試劑的反相高效液相色譜分析方法”以及“使用氨基柱的色譜分析方法”^{[2] [3]},可前者見VB12的色譜保留存在難點，離子對色譜法平衡時間較長；后者氨基柱法需特別注意柱子的使用范圍，對于習慣使用普通C18柱分析的用戶而言不太適應。

國標對于低添加VB12預混合飼料的指導（樣品溶液中維生素B??濃度小于2μg/ml），需要進行離線的樣品富集、凈化步驟，常用手段包括固相萃取以及免疫親和法^[3][4]，首先需要進行一次富集處理，多批次樣品送檢過程繁瑣且時間較長。

對癥下藥——雙三元液相在線富集、除雜

使用賽默飛雙三元液相系統，樣品只需簡單超聲過濾即可大體積直接上樣富集、除雜、分析，整個過程全部實現自動化。下面是雙三元液相在線富集、除雜、分析的自動化工作流程：

樣品凈化

轉移 / 分離

分離 / 再生

賽默飛雙三元特色方案介紹

賽默飛基于雙三元液相平臺開發了維生素B??全自動在線樣品富集測定方法，樣品超聲后過濾即可直接上樣測定。

相比采用離子對色譜冗長的平衡時間，該法具有分析時間短，峰形良好的優點。

Thermo Scientific? UltiMate? 3000

雙三元系統

雙三元系統測試結果^[5]：

VB12標準溶液色譜圖

VB12實際樣品溶液色譜圖

本方法重現性良好，連續6次進樣重現性RSD=0.48%，且通過色譜柱優化，相對于國標方法而言，峰形更加良好（參見下圖國標方法色譜圖），且自動化程度高，大大提升了分析效率。

維生索B??標準色譜圖（氨基柱)見圖A.1；維生素B??標準色譜圖（C??柱）見圖A.2。

圖A.1 10μg/mL 維生索B??標準溶液色譜圖（氨基柱）

圖A.2 10μg/mL 維生索B??標準溶液色譜圖（C??柱）

參考文獻：

【1】在線二維液相色譜法同時測定嬰幼兒和成人配方營養品中的維生素A、D3和E （張艷海，其布勒哈斯等，色譜， Vol.33 No.3 291-297）

【2】GBT9841-2006: 飼料添加劑維生素B12粉劑

【3】GBT17819-2017:添加劑預混合飼料中維生素B12的測定高效液相色譜法

【4】GBT5009.217-2008:保健食品中維生素B12的測定

【5】AN_19026_HPLC_食品_Ultimate 3000 在線凈化富集法測定預混合飼料中Vitamin B12

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